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转录因子Bombyx bHLH Bmdimm与Bmchip的相互作用

发布时间:2019-09-08     浏览次数:

转录因子Bombyx bHLH Bmdimm与Bmchip的相互作用
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[目的]转录因子bHLH Bmdimm是调控Bombyxmori 5期末丝素蛋白重链基因表达的重要转录因子。
由于发现Bmdimm蛋白含有可以进行遍在蛋白化修饰的K43赖氨酸残基,因此推测Bmdimm可以通过遍在蛋白化降解。
Bmchip属于家蚕E3泛素连接酶家族的U-box亚家族,在家蚕第五期的丝腺中表达。
本文的目的是揭示Bmdimm与Bmchip之间的相互作用,以更好地了解家蚕Bmdimm泛素化及其对丝素蛋白重链基因转录调控的生物学意义。是的。
方法采用家蚕组织基因芯片的表达谱,分析Bmdimm和Bmchip在后部丝腺中的表达谱。分别通过PCR和基因合成获得Bmdimm和Bmchip CDS序列,并构建并用不同的原核表达载体转化。大肠杆菌表达目标蛋白质,分析最佳表达条件,并纯化蛋白质。通过镍柱亲和层析融合,蛋白酶消化的插入和通过镍柱亲和层析除去融合标记来纯化Bmdimm和Bmchip蛋白;使用凝胶过滤层析分析蛋白质的状态。采用圆二色光谱研究了Bmdimm和Bmchip在溶液中的聚集,Bmdimm和Bmchip蛋白的二级结构,并通过Western-Western转移和下拉研究了Bmdimm和Bmchip在体外的相互作用;迁移研究亲和力。它是Bmdimm和Bmchip的联盟。
[结果]基因芯片的表达谱显示Bmdimm和Bmchip在第五期家蚕的后部丝腺中表达。
构建各种Bmdimm和Bmchip表达载体,并在0℃下发现ppSUMO-Bmdimm和pET-32M→3C-Bmchip的表达载体。
通过3mmol?L(-1)IPTG诱导最佳表达,并基于该表达纯化Bmdimm和Bmchip蛋白。凝胶过滤分析表明Bmdimm和Bmchip蛋白主要以溶液中的二聚体形式存在,二色光谱显示Bmdimm和Bmchip蛋白均含有α-螺旋结构。Western blotting和pull-down结果显示Bmdimm和Bmchip可以在体外结合。通过低温电泳(750±28)计算Bmdimm和Bmchip的平衡解离常数。
6)μmol?L?( - 1)。
[结论]bHLH bmdimm家蚕和Bmchip泛素连接酶的转录因子在第5只家蚕的后部丝腺中表达,可在体外瞬时相互作用,Bmdimm被丝素蛋白泛素化。下调大肠杆菌重链基因转录的修饰|文章信息| J-GLOBAL
作者单位:
该州西南大学家蚕基因组生物学的主要实验室。西南大学生物技术学院;重庆新丝绸材料工程研究中心;[基金]:国家基础研究与开发规范项目(项目“973”)(2012 CB114602)
中国国家自然科学基金(31402139,31572465)
重庆市基础与边境研究计划(cstc2015jcyjA00040)
中央大学和大学的基本商业研究费用(XDJK2013C049,XDJK2013A019,SWU112086)
西南大学博士课程基金(SWU 112 111)[类别编号]:S881。
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